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第九節(jié) 燒傷濕性醫(yī)療技術(shù)MEBO的抗菌作用實(shí)驗(yàn)研究
作者：中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)燒傷專業(yè)委員會(huì) 出版社：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社 發(fā)行日期：2000年6月 【摘要】 觀察濕潤(rùn)燒份膏 (MEBO)對(duì)有芽孢厭氧菌（破傷風(fēng)桿菌)、無芽孢厭氧菌（脆弱類桿菌、痤瘡丙酸桿菌)和真菌(白色念珠菌) 等的抗菌作用。將上述細(xì)菌分別接種在含 MEBO的瓊脂培養(yǎng)基上傳代培養(yǎng)，觀察MEBO 對(duì)細(xì)菌的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 MEBO 使細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)培養(yǎng)特性等方面發(fā)生變異，并明顯地影響細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖速度和侵袋力。結(jié)果表明 MBBO 具有較強(qiáng)的廣譜抗菌作用。
【關(guān)鍵詞】 MEBO 抗菌作用 厭氧菌 真菌 細(xì)菌變異
大量燒傷創(chuàng)傷病人采用濕潤(rùn)暴露療法用 MEBO 治療的臨床資料表明，MEBO 具有較強(qiáng)的控制燒傷創(chuàng)面感染的能力，其作用機(jī)制是多方面的。本實(shí)驗(yàn)觀察了 MEBO 使厭氧菌芽孢桿菌一破傷風(fēng)桿菌、無芽孢厭氧菌-脆弱類桿菌和痤瘡丙酸桿菌、真菌一白色念珠菌等在形態(tài)結(jié)構(gòu)、菌落特點(diǎn)和致病性等方面發(fā)生變異。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，燒傷濕潤(rùn)暴露療法的MEBO具有較強(qiáng)的廣譜抗菌作用，又能給子被燒傷破壞了的機(jī)體局部皮膚組織殘存細(xì)胞以維持正常生命的環(huán)境和促進(jìn)分裂再生的條件,是一種具有雙向調(diào)節(jié)作用的藥物。
材料和方法
1.材料 MEBO：北京光明中醫(yī)燒傷創(chuàng)瘍研究所研制。B224 型厭氧培養(yǎng)缸：濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科任全君研制。厭氧培養(yǎng)基：上海生物制品研究所。菌種：脆弱類桿菌、痤瘡丙酸桿菌，購(gòu)自上海醫(yī)科大學(xué)。破傷風(fēng)桿菌、白色念珠菌，由濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院院檢驗(yàn)科提供。以上細(xì)菌經(jīng)厭氧瓊脂培養(yǎng)基傳代后備用。
2.方法及分組
?。?）(MEBO 試驗(yàn)組：將四種細(xì)菌(脆弱類桿菌、痤瘡丙酸桿菌、破傷風(fēng)桿菌和白色念珠菌)分別接種在含有一定濃度 MEBO 的培養(yǎng)基上。厭氧菌置于厭氧培養(yǎng)缸 37°C培養(yǎng)48~72h為代。白色念珠菌置于恒溫箱37C培養(yǎng)48~721為一代。連續(xù)傳代4~6代，每代進(jìn)行革藍(lán)染色(Gram's),觀察細(xì)菌的染色反應(yīng)及形態(tài)大小、菌落特點(diǎn)等。
(2)正常對(duì)照組：以上四種細(xì)菌在接種到含 MEBO 的培養(yǎng)基前（原代菌）進(jìn)行 Gram's, 觀察細(xì)菌形態(tài)、大小及菌落特點(diǎn)等。
檢測(cè)指標(biāo)
1.細(xì)菌變異現(xiàn)象的觀察
(①)觀察破傷桿菌、脆弱類桿菌和痤論丙酸桿菌：將上述三種細(xì)菌分別接種在含有一定濃度MEBO 的培養(yǎng)基上，進(jìn)行傳代培養(yǎng)后觀察每代細(xì)菌的形態(tài)、菌落等的變異現(xiàn)象。
(2觀祭白色念珠菌在含 MEBO 培養(yǎng)基上的變異現(xiàn)象。
2.芽管試驗(yàn)
將原代菌及在 MEBO 培養(yǎng)基上傳代的1~2代、5~6代白色念珠菌分別接種在0.5ml人血清液體培養(yǎng)基中，置于37°C水浴箱水浴 3h，取菌涂片、染色、計(jì)數(shù)500個(gè)白色念珠菌，求其芽管產(chǎn)生百分率。
3.MEBO 對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)速度的影響 將在含有 MEBO 的培養(yǎng)基上傳代的第 10代金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和原代金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌用無菌取菌環(huán)分別取相同的菌落，研磨于0.1ml 鹽水中，再加鹽水至 1ml.分別取菌置于血球計(jì)數(shù)盤上計(jì)數(shù)細(xì)菌數(shù) /ml迓行比較。
4. MEBQ 對(duì)綠膿桿菌侵襲力的影響 取在MEBO 培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)的第 10代綠膿桿菌和在普通培養(yǎng)基上培養(yǎng)的原代綠膿桿菌，分別取菌落于鹽水中計(jì)數(shù)、稀釋，使其含細(xì)菌數(shù)為3 ×109/m1。然后再取菌液分別給小鼠皮內(nèi)注射0.Iml，201后處死。于注射細(xì)菌部位，由皮膚到肌冉皮膚到肌層，取一長(zhǎng)方形組織塊，進(jìn)行固定包埋，組織切片，HE染色等。觀察病理變化。
2.MEBO對(duì)白色念珠菌的作用 見表5-9-2。
討 論
細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖迅速，世代周期短（一般20min 為一代)。因此，有些細(xì)菌在繁殖過程中易受環(huán)境中不利因素的影響而發(fā)生細(xì)菌性狀的變異。如細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的變異、培養(yǎng)特性、毒力、抗原性和耐藥性等方面的變異。細(xì)菌形態(tài)的變異與細(xì)菌的分裂有關(guān)。細(xì)菌分裂過程是一復(fù)雜的過程，它對(duì)環(huán)境中非致死性不利因素作用的敏感性比蛋白質(zhì)或DNA 合成對(duì)有害物質(zhì)的敏感性更大。因此，細(xì)菌細(xì)胞可出現(xiàn)多形態(tài)—多核絲狀或圓球狀等變異，如破傷風(fēng)桿菌、脆弱類桿菌。這是由于細(xì)胞壁合成妥影響不能及時(shí)形成或斷裂，而代謝仍在進(jìn)行有關(guān)。細(xì)菌性狀變異的發(fā)生與作用于細(xì)菌的不利因素的強(qiáng)度、作用的時(shí)間有密切關(guān)系。從本實(shí)驗(yàn)中清楚地觀察到，同一種細(xì)菌和在含不同濃度MEBO 的培養(yǎng)基上出現(xiàn)形態(tài)變異的時(shí)間及形態(tài)變異的特點(diǎn)是有差異的。
本實(shí)驗(yàn)觀察了 MEBO 對(duì)破傷風(fēng)桿菌、脆弱類桿菌、痤瘡丙酸桿菌和白色念珠菌等的抗菌作用。這些細(xì)菌都是人體正常菌群，屬于條件致病菌，在一定條件下可致病，大多數(shù)屬于內(nèi)源性感染。燒傷病人由于大量應(yīng)用抗生素，易造成菌群失調(diào)，導(dǎo)致條件致病菌白色念珠菌的感染，時(shí)有報(bào)道。燒傷創(chuàng)面的細(xì)菌感染，需氧菌（如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌等）仍是優(yōu)勢(shì)菌。由于燒傷創(chuàng)面可發(fā)生缺血壞死，也易被漏檢。王德旺 等（1983年)報(bào)告 34例燒傷創(chuàng)面厭氧芽孢桿菌培養(yǎng)陽性率為 23.9%，且均為多菌性混合感染。
破傷風(fēng)桿菌屬于厭氧芬孢桿菌，在含 MEBO 的培養(yǎng)基中傳代后，出現(xiàn)長(zhǎng)絲狀變異，在第3三代有較多的菌體形成芽孢。我們知道細(xì)菌是以二分裂法進(jìn)行繁殖，具有繁殖能力的菌體稱為繁殖體。一個(gè)細(xì)菌只形成一個(gè)芽孢，一個(gè)芽孢在適宜條件下也只生成一個(gè)菌體（繁殖體），細(xì)菌數(shù)量并不增多，所以細(xì)菌芽孢的形成并非細(xì)菌繁殖方式，而是細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)缺乏等不利因素環(huán)境的一種反應(yīng)，此時(shí)細(xì)菌的生命活動(dòng)處于休眠狀態(tài)，代謝緩慢，但芽孢保持了細(xì)菌的生命活動(dòng)。芽孢在不適宜因素存在的環(huán)境中是不能形成繁殖體而進(jìn)行繁殖的。破傷風(fēng)桿菌屬于厭氧菌，只有在一定條件下細(xì)菌才能進(jìn)行繁殖，產(chǎn)生外毒而致病。同樣，白色念珠菌以出芽方式進(jìn)行繁殖，在含 MEBO 的培養(yǎng)基上傳代至第6代，見到芽生孢子較正常念珠菌的芽生孢子要少得多，芽管產(chǎn)生率由正常的90%降至 0.5%~2%。由此可見，MEBO對(duì)破傷風(fēng)桿菌、白色念珠菌的生長(zhǎng)繁殖、致病性等產(chǎn)生的影響。
從表5-9-3可見到要含 MEBO 培養(yǎng)基上傳代至第10代的綠膿桿菌，經(jīng)20h培養(yǎng)，菌落的細(xì)菌數(shù)/ml 與原代細(xì)菌相比減少約29/30倍，對(duì)小鼠機(jī)體組織的侵襲力顯著降低。結(jié)果說明細(xì)茵處于不利因素的條件下，不僅使細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生交異，而且它的生理特性也隨之發(fā)生了變化。
實(shí)驗(yàn)硏究曾觀察了MEBO 對(duì)燒傷感染常見的G+需氧菌金黃色葡萄球菌、G 菌大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌等的抗菌作用，和本實(shí)驗(yàn)對(duì)G有芽孢厭氧菌（破傷風(fēng)桿菌）、G無芽孢厭氧菌（痤瘡丙酸、脆弱類桿菌）及真菌(白色念珠菌）等的抗菌作用。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果和臨床研究資料表明，MEBO 是一種具有較強(qiáng)的廣譜抗菌作用和促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合的雙向調(diào)節(jié)作用的藥物。