二. 實驗方法:
1.取一只孕16日齡的昆明種雌性小白鼠,頸椎脫臼法處死,先置于75%乙醇中浸洗一遍(2分鐘),再置于75%乙醇中消毒5分鐘;
2.用眼科剪以及止血鉗先剪開雌鼠的腹部皮膚,鈍性分離至兩側(cè),充分暴露腹壁肌肉,然后小心剪開腹壁全層,切勿傷及內(nèi)臟及小鼠胚胎;
3.剪開子宮,從宮腔中取出胚胎鼠,置入無菌平皿中;
4.用雙抗-冷PBS將胚胎鼠體表洗滌兩次,每次1分鐘;
5.用顯微外科剪刀將胚胎鼠的腹壁剪開,再用顯微外科鑷子夾起鼠胃,自賁門及幽門部切斷,得到全胃,切掉并棄去近賁門的1/3,然后沿胃大彎處縱行切開鼠胃,充分暴露胃粘膜;
6.用雙抗-冷PBS將胚胎鼠胃連續(xù)洗滌兩次,每次1分鐘;
7.將鼠胃置于含雙抗的MEM培養(yǎng)液中浸洗2次,每次1分鐘;
8.將鼠胃剪成極小的器官型植塊,面積約1mm×1mm;
9.將植塊置于12孔培養(yǎng)板的培養(yǎng)孔中央,每孔5塊,間隔約2mm,布局合理,粘膜面向上,輕輕按壓每塊植塊,使其緊貼培養(yǎng)板的表面;
10.沿培養(yǎng)孔的邊緣,緩慢加入約0.5ml的完全MEM培養(yǎng)液,勿使培養(yǎng)液與植塊接觸;
11.將培養(yǎng)板置于37、5%培養(yǎng)箱中預(yù)孵育1小時;
12.每孔加完全MEM培養(yǎng)液2ml,輕拿輕放,切勿使植塊飄起,實驗組加GIC;
13. 實驗組和對照組同步等量換液,每次去掉原液的1/2左右, 再加入相同量的新鮮MEM培養(yǎng)液;
14.用倒置顯微鏡觀察植塊生長情況,用顯微成像記錄分析系統(tǒng)記錄所觀察的結(jié)果,并用計算機保存圖像。
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